국립청소년농생명센터'생활과 생명공학(I)'단위 프로그램 소개 영상

ㅇ국립청소년농생명센터
ㅇ단위 프로그램 '생활과 생명공학(I)' 소개 영상
ㅇ[식물세포 DNA 추출]: DNA 추출과 정제 과정을 통해 순수한 DNA를 추출하는 실험


프로그램 내용
STEP 1. 세포파쇄 및 DNA재생
① 식물조직(0.1g)을 마이크로튜브에 담아 분쇄한다.
② 마이크로튜브에 PL완충용액 400μl를 넣고, 볼텍스믹서로 섞는다.
③ 드라이배스에 꽂아 65℃에서 5분마다 뒤집어 가며 10분간 배양한다.
④ 마이크로튜브에 PD완충용액 140μl를 넣고, 볼텍스믹서로 섞는다.
⑤ 아이스랙에 마이크로튜브를 5분간 담아둔다.

STEP 2. DNA 추출
① 컬렉션튜브에 꽂은 필터칼럼에 마이크로큐브 속 용액을 모두 옮겨 넣는다.
② 만들어진 필터칼럼-컬렉션튜브를 미니원심분리기에서 1,000rpm으로 2분간 회전시킨다.
③ 필터칼럼에서 컬렉션튜브로 흘러나온 용액 500μl를 새 마이크로튜브에 옮겨 담는다.
④ 마이크로튜브에 BD완충용액 750μl를 넣고, 볼텍스믹서로 섞는다.
⑤ 마이크로튜브 안 용액 약 700μl를 추출칼럼-컬렉션튜브로 옮겨 담는다.
⑥ 미니원심분리기에서 1,000rpm으로 1분간 회전시킨다.
⑦ 컬렉션튜브로 흘러나온 용액은 버리고, ⑤⑥과정을 1회 반복한다.

STEP 3. DNA 정제
① 컬렉션튜브로 흘러나온 용액은 버리고, 추출칼럼에 세척완충용액(cw완충용액) 700μl를 넣는다.
② 미니원심분리기에서 1,000rpm으로 1분간 회전시킨 뒤 흘러나온 용액을 버린다.
③ 추출칼럼에 세척완충용액 300μl를 넣는다.
④ 고속원심분리기를 이용해 12,000rpm으로 1분간 회전시킨 뒤 흘러나온 용액을 버린다.

STEP 4. 순수한 DNA 추출
① 추출칼럼을 새 마이크로튜브에 꽂고, 용출완충용액(AE완충용액) 100μl를 넣는다.
② 상온에 5분을 두어 용액이 반응하도록 한다.
③ 고속원심분리기에서 12,000rpm으로 1분간 회전시켜 순수한 DNA를 얻는다.
④ 보관이 필요한 경우 4℃로 냉장 보관한다.

※ 추출한 엽록체 DNA의 PCR을 통한 증폭 및 전기영동을 통한 확인은 '생활과 생명공학(II)'에서 계속 됩니다.

ㅇ 프로그램 지도 : 갈매기(서수나), 사탕(김수진)
ㅇ 촬영/편집 : 김형철, 나도운

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