대학원생vlog|실험실편 #1 transformation: 실험실패ㅋ

오늘 한건 아주 잘 되는 실험인데 연구실 역사상 최초 실패가 아닐까 합니다.-_-;
어디서 실수 했는지 모르겠으나 competent cell 에 plasmid가 삽입되지 않은 것 같습니다.(plasmid는 그냥 DNA일 뿐이라서 오래되서 변형된다는건 웃긴 이야기 같고 competent cell도 -70도 냉장고에서 보관하기 때문에 아마 이상은 없을것 같네요. 가장 확률높은건 제가 어디선거 바보같이 해놓고서 모르고 있는 상황인듯ㅋ)
다음주에 엠피실린 넣은 액체배지와 안넣은 액체배지에 cell 키워서 뭐가 잘못되었는지 테스트 해봐야겠네요.


아래는 제가 사용한 Transformation(=형질전환) 프로토콜(인터넷 치면 다 나옴) 입니다.
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1. -20 냉장고에서 Plasmid vector(ex:pUC19) 를 꺼낸다.

2. -80도 냉장고에서 Competent Cell를 꺼낸다.(우리 연구실은 JM109씀)

3. Competent Cell 과 Plasmid vector 를 상온에서 해동한다.

4. JM109 9 uL 와 pPIA2-6 1 uL 를 섞은 뒤에 빙수(?)에 넣고 10분간 기다린다.(이때 DNA가 Competent Cell에 들어가게 된다. (비율은 10% 이하. 예를들어 JM109 100 uL, pPIA2-6 1 uL 도 가능함)

5. 위에서 작업한 (Plasmid가 삽입된) Competent Cell 3 uL를 고체배지 위에 뿌린 뒤에 알코올로 소독된 삼각막대기로 문지른다.(문지를 때 액체가 없는 곳을 먼저 문질러서 막대기의 열을 식한다.)

6. 샬렛을 파라필름으로 싼 다음에 뒤집은 상태로 37도에서 overnight incubating 시킨다.(약 8~12시간) (뒤집지 않으면 물이 생겨서 세균 등이 자랄 수도 있다.)